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實(shí)驗(yàn)方法——抗體檢測常用的幾種方法
  • 更新日期:2023-05-11      瀏覽次數(shù):1009
    • 實(shí)驗(yàn)方法——抗體檢測常用的幾種方法

      一、直接法

      抗原直接固定在固相載體上,參加酶符號的一級抗體,即可測定抗原總量,此一級抗體的特異性非常重要。

      1. 優(yōu)勢:操作手續(xù)簡略,因無須運(yùn)用二抗可防止交互反響。

      2. 缺陷:實(shí)驗(yàn)中的一抗都得用酶符號,但不是每種抗體都適合做符號,費(fèi)用相對進(jìn)步。

      二、間接法

      此測定辦法與直接法相似,不一樣在于一級抗體沒有酶符號,改用酶符號的二級抗體去辨識(shí)一級抗體來測定抗原量。

      1. 優(yōu)勢:二抗能夠加強(qiáng)信號,并且有多種挑選能做不一樣的測定剖析。不加酶符號的一級抗體則能保存它多的免疫反響性。

      2. 缺陷:交互反響發(fā)作的機(jī)率較高。

      三、雙抗體夾心法

      被檢測的抗原包被在兩個(gè)抗體之間,其間一個(gè)抗體將抗原固定于固相載體上,即捕捉抗體。另一個(gè)則是檢測抗體,此抗體可用酶符號后直接測定抗原的量;或不符號,再透過酶符的二級抗體來測定抗原的量。這兩種抗體有必要當(dāng)心選擇,才可防止交互反響或競爭一樣的抗原部位。

      1. 優(yōu)勢:高活絡(luò)、高專一性,抗原無須事前純化。

      2. 缺陷:抗原必定得具有兩個(gè)以上的抗體部位。

      四、根據(jù)細(xì)胞法(xin ELISA技術(shù)) 是一種新的定性蛋白檢測技術(shù),將細(xì)胞直接在微孔板里培育,待檢測時(shí),不需抽提蛋白和裂解細(xì)胞,便可直接丈量微孔板里蛋白經(jīng)影響或抑制作用后的改變。

      1. 優(yōu)勢:無需裂解細(xì)胞,所以方針蛋白丟失zui少,可測定完好細(xì)胞、黏附細(xì)胞、還有非粘附細(xì)胞。

      2. 缺陷:不能測定抗原量。

      五、競爭法

      樣本里的抗原(自在抗原)和純化并固定在固相載體上的抗原(固定抗原)一同競爭一樣的抗體,當(dāng)樣品里的自在抗原越多,就能夠越多的抗體,而固定抗原就只能到較少的抗體,反之亦然。經(jīng)清潔過程,洗去自在抗原和抗體的復(fù)合物,只留下固定抗原和抗體的復(fù)合物,拿來與只要固定抗原的對照組成果相比擬,依據(jù)呈色區(qū)別就可計(jì)算出樣品里的抗原含量。

      1. 優(yōu)勢:可適用比擬不純的樣本,并且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性很高。

      2. 缺陷:全體的敏感性和專一性都較差。

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