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一文與您分享JP標(biāo)準(zhǔn)品的實(shí)驗(yàn)步驟
  • 更新日期:2023-02-07      瀏覽次數(shù):330
    •   JP標(biāo)準(zhǔn)品的一種或多種特性值是按一個(gè)特定的程序確定的,這個(gè)程序可以確定每個(gè)特性值能夠溯源到可以準(zhǔn)確地實(shí)現(xiàn)表示其特性值測(cè)量單位,并且每個(gè)被確認(rèn)的特性值都附有規(guī)定置信區(qū)間的不確定度限值。
       
        下面咱們來(lái)了解下JP標(biāo)準(zhǔn)品的實(shí)驗(yàn)步驟:
       
        1.加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
       
        2.棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜,37℃反應(yīng)60分鐘。
       
        3.溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
       
        4.每孔加檢測(cè)溶液B工作液(同檢測(cè)A工作液)100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
       
        5.溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
       
        6.依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
       
        7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
       
        8.用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進(jìn)行檢測(cè)。第二抗體是能和抗體結(jié)合的,即抗體的抗體。主要用于檢測(cè)抗體的存在。因?yàn)樵谶@個(gè)時(shí)期各種雜交瘤細(xì)胞同時(shí)旺盛生長(zhǎng),互相爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)和空間,而產(chǎn)生抗體的細(xì)胞有被淹沒(méi)和淘汰的可能。
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