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ERM-DA470k_IFCC 人類血清(蛋白質(zhì))的選材
  • 更新日期:2023-08-14      瀏覽次數(shù):588
    • ERM-DA470k_IFCC 人類血清(蛋白質(zhì))用作血清蛋白免疫測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),對(duì)于它的材料的要求是,除了對(duì)同質(zhì)性、穩(wěn)定性、可追溯性和可互換性的要求之外還要具備以下條件:

      1、最終材料中蛋白質(zhì)的濃度應(yīng)該足夠高,以便材料的稀釋可以覆蓋測(cè)定測(cè)量間隔的相關(guān)部分

      2、材料應(yīng)該是光學(xué)透明的。這一特性很重要,因?yàn)榇蠖鄶?shù)臨床免疫測(cè)定使用光學(xué)檢測(cè)方法。這意味著材料必須具有低含量的脂質(zhì)和脂蛋白

      3、根據(jù)連續(xù)參考材料校準(zhǔn)的測(cè)定結(jié)果必須具有連續(xù)性。這是臨床化學(xué)中的一個(gè)重要問(wèn)題,因?yàn)槭褂脜⒖挤秶蜎Q策限要求測(cè)量結(jié)果在更長(zhǎng)的時(shí)間范圍內(nèi)具有可比性


      對(duì)于大多數(shù)通過(guò) ERM-DA470 認(rèn)證的蛋白質(zhì),該材料具有足夠的可交換性,可以顯著降低批間差異。因此,決定按照與適用于 ERM-DA470 的程序類似的程序生產(chǎn)新材料。


      血清是從 6 個(gè)采血中心采集的血液中按照確保其來(lái)自健康供體且血清脂質(zhì)含量低的程序生產(chǎn)的。生產(chǎn)了兩個(gè)中試批次,一個(gè)只加標(biāo)了 CRP,一個(gè)加標(biāo)了 CRP 和 β2 微球蛋白 (B2M)。 試驗(yàn)批次用于驗(yàn)證加工程序產(chǎn)生的材料具有所需的特性(均勻性、穩(wěn)定性、B2M 的可交換性、材料的光學(xué)透明度)。 在此基礎(chǔ)上,決定進(jìn)一步處理血清的主要部分,并在材料中加入 CRP(來(lái)自胸腔積液)和重組 B2M。血清分 5 批進(jìn)行處理,然后合并,加入 B2M 和 CRP 并裝入小瓶(每瓶 1 mL 血清)。 血清在小瓶中凍干,然后儲(chǔ)存在-70°C。


      針對(duì) 14 種蛋白質(zhì)評(píng)估了材料的均質(zhì)性和穩(wěn)定性:A2M、AAG、AAT、ALB、B2M、C3c、C4、CER、HPT、IgA、IgG、IgM、TRF 和 TTR。 與 ERM-DA470k_IFCC 人類血清(蛋白質(zhì)) 相比,ACT 未在新材料中獲得認(rèn)證。 B2M 被添加到蛋白質(zhì)列表中,以便稍后對(duì)其進(jìn)行認(rèn)證。 對(duì)于 CER 和 CRP,在此認(rèn)證活動(dòng)期間沒(méi)有為材料分配任何值。


      使用ERM-DA470k_IFCC 人類血清(蛋白質(zhì))作為校準(zhǔn)物,對(duì) 12 種蛋白質(zhì)進(jìn)行了表征。這是使用價(jià)值傳輸協(xié)議實(shí)現(xiàn)的,該協(xié)議可被視為參考程序 [6]。在所謂的封閉值轉(zhuǎn)移程序中,針對(duì)常用儀器校準(zhǔn)物測(cè)量校準(zhǔn)物 (ERM-DA470) 的 6 個(gè)稀釋度和 ERM-DA470k/IFCC 的 6 個(gè)稀釋度,并根據(jù)斜率的比率確定目標(biāo)材料的濃度回歸線(測(cè)量濃度與稀釋度)。在開(kāi)放式值傳遞程序中,ERM-DA470 用作儀器中的校準(zhǔn)物,目標(biāo)材料的 6 種稀釋度直接針對(duì)該校準(zhǔn)物的不同稀釋度進(jìn)行測(cè)量。使用回歸線的斜率(內(nèi)插濃度與稀釋度)確定目標(biāo)材料的濃度。


      用于測(cè)量蛋白質(zhì)濃度的技術(shù)是比濁法、比濁法,對(duì)于 ALB,還有可見(jiàn)光譜法。使用不同的平臺(tái)(即儀器;Abbott Architect、Beckman Immage、BN II 和 BN ProSpec、不同的 Hitachi 儀器、Eiken LX 2200、Olympus AU640、Roche Integra)和試劑進(jìn)行測(cè)量。共有 18 個(gè)實(shí)驗(yàn)室參與了價(jià)值分配,4 個(gè)使用開(kāi)放式價(jià)值轉(zhuǎn)移程序,12 個(gè)使用封閉式價(jià)值轉(zhuǎn)移程序,2 個(gè)使用開(kāi)放式和封閉式程序(見(jiàn)第 6.1 節(jié))。大多數(shù)特性測(cè)量要么在 ISO/IEC 17025 認(rèn)證下進(jìn)行,要么在 ISO 13485 質(zhì)量體系的范圍內(nèi)進(jìn)行。從其余實(shí)驗(yàn)室獲得了技術(shù)能力和應(yīng)用文件控制的書(shū)面證據(jù)。

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