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免疫定量分析中標(biāo)準(zhǔn)品的制備要求
  • 更新日期:2023-07-21      瀏覽次數(shù):446
    • 標(biāo)準(zhǔn)品是標(biāo)記免疫分析定量的依據(jù)。標(biāo)準(zhǔn)品的正確與否直接影響樣品的測定結(jié)果。如果在連續(xù)測定中,或各實(shí)驗(yàn)室之間使用的標(biāo)準(zhǔn)品不一致,則可影響到實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可比性。為此,對標(biāo)記免疫分析所使用的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)滿足如下要求。

      1、化學(xué)結(jié)構(gòu):原則上標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)與被測物具有相同的化學(xué)結(jié)構(gòu),包括相同的立體化學(xué)結(jié)構(gòu)。但在實(shí)際工作中,用化學(xué)結(jié)構(gòu)相同的物質(zhì)作標(biāo)準(zhǔn)品是十分困難的。這是由于一方面來源有限,另一方面有些被測物本身的化學(xué)結(jié)構(gòu)還不清楚,或是有明顯的異型性。所以有時也用結(jié)構(gòu)類似的物質(zhì)作標(biāo)準(zhǔn)品。此時,應(yīng)充分了解這些物質(zhì)與真正標(biāo)準(zhǔn)品之間的定量關(guān)系。

      2、化學(xué)純度:所有通過化學(xué)合成法制備的小分子化合物,都應(yīng)是高化學(xué)純度的純品。對某些蛋白類物質(zhì),則可能由于純化的方法不同而有差異。對此,在最初建立該方法時,應(yīng)與國際上公ren的標(biāo)準(zhǔn)參考品或高純度的純品進(jìn)行比對。

      3、免疫純度:標(biāo)記免疫分析是通過比較被測物質(zhì)與標(biāo)準(zhǔn)品的免疫活性實(shí)現(xiàn)的,故被測物質(zhì)與標(biāo)準(zhǔn)品對所用抗體的免疫活性應(yīng)該一致,即兩者對所用的同一抗體有相同的親和力。因此,標(biāo)準(zhǔn)品的免疫純度比其化學(xué)純度更重要。

      4、反應(yīng)介質(zhì):免疫學(xué)反應(yīng)受反應(yīng)介質(zhì)和溫度等條件的影響,所以理論上要求標(biāo)準(zhǔn)品和被測物應(yīng)在相同的介質(zhì)中進(jìn)行反應(yīng)。如測定血清中某物質(zhì)的濃度,其所用的標(biāo)準(zhǔn)品也應(yīng)溶解在無被測物的零值血清中;如測定尿液中某物質(zhì)的濃度,其所用的標(biāo)準(zhǔn)品也應(yīng)溶解在無被測物的尿液中等。但在實(shí)際工作中這一點(diǎn)很難做到。因?yàn)?,血清中的成分十分?fù)雜,因而無被測物的零值血清的制備非常困難,而且個體血清中還可能存在一些干擾物質(zhì)。理想的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)該用與被測樣品相同的基質(zhì)(如血清),先將被測物質(zhì)去除,然后再加入已知量的被測物質(zhì)的純品。

      5、干擾物質(zhì):標(biāo)準(zhǔn)品中不能有干擾分析的物質(zhì)。在作為標(biāo)準(zhǔn)品使用前,必須對那些從機(jī)體提取到的大分子物質(zhì)活性進(jìn)行測定。

      6、標(biāo)準(zhǔn)品的批量:為保證檢測的連續(xù)可比性,每批標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)有相當(dāng)大的量,以保證在較長的時間內(nèi)使用。每批標(biāo)準(zhǔn)品如保存的條件適當(dāng),在相當(dāng)長的時間內(nèi)可保持其濃度和免疫活性的穩(wěn)定。這對于生產(chǎn)標(biāo)記免疫分析試劑的廠家尤為重要。

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