亚洲日韩国产精品乱-久,国产午夜成人免费看片无遮挡,散装肉脯(h)海棠书屋,好深好湿好硬顶到了好爽

產(chǎn)品分類(lèi)
您現(xiàn)在的位置:首頁(yè) > 技術(shù)文章 > 細(xì)胞凋亡檢測(cè)(Annexin V-FITC 雙染法)
細(xì)胞凋亡檢測(cè)(Annexin V-FITC 雙染法)
  • 更新日期:2023-04-06      瀏覽次數(shù):2355
    • 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>
      通過(guò)檢測(cè)處于凋亡狀態(tài)的細(xì)胞數(shù)量來(lái)檢驗(yàn)?zāi)康幕蚺c細(xì)胞凋亡的關(guān)聯(lián)或者藥物對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。

      二、實(shí)驗(yàn)原理
      在正常的活細(xì)胞中,磷脂酰絲氨酸 (phosphotidylserine,PS) 位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè),但在早期凋亡細(xì)胞中,PS 從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面,暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。

      Annexin-Ⅴ能與 PS 高親和力結(jié)合。可通過(guò)細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。用標(biāo)記了 FITC 的 AnnexinⅤ作為熒光探針,利用流式細(xì)胞儀或熒光
      顯微鏡可檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。細(xì)胞壞死的過(guò)程中也會(huì)發(fā)生細(xì)胞膜損傷,壞死的細(xì)胞會(huì)結(jié)合 Annexin V-FITC。

      Annexin V-FITC 通常與細(xì)胞膜非滲透性核酸熒光染料聯(lián)合使用以檢測(cè)凋亡細(xì)胞。常用的染料是 PI。正常細(xì)胞和早期凋亡細(xì)胞的細(xì)胞膜是完整的,核酸染料 Propidium iodide(PI) 不能透過(guò)完整的細(xì)胞膜,但在凋亡中晚期的細(xì)胞和壞死細(xì)胞,PI 能夠透過(guò)細(xì)胞膜與細(xì)胞核結(jié)合呈現(xiàn)紅色。

      將 AnnexinⅤ與 PI 匹配使用,可以將凋亡早期的細(xì)胞和晚期的細(xì)胞以及死細(xì)胞區(qū)分開(kāi)來(lái)。壞死細(xì)胞可以同時(shí)與 Annexin V-FITC 和 PI 結(jié)合顯色,而 PI 則被排除在活細(xì)胞 (FITC 陰性) 和早期凋亡細(xì)胞 (FITC 陽(yáng)性) 之外。在沒(méi)有巨噬細(xì)胞的情況下,凋亡的最后階段會(huì)像細(xì)胞壞死一樣發(fā)生整個(gè)細(xì)胞的解體,從而使凋
      亡晚期的細(xì)胞也同時(shí)被 FITC 和 PI 結(jié)合染色呈現(xiàn)雙陽(yáng)性。

      三、實(shí)驗(yàn)步驟
      1. 待各實(shí)驗(yàn)組 6 孔板細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋率約為 70% 時(shí),收集上清,胰酶消化貼壁細(xì)胞,完quan培養(yǎng)基重懸成細(xì)胞懸液,與上清細(xì)胞收集于同一 5 mL 離心管中,每組設(shè)三個(gè)復(fù)孔 (為保證上機(jī)細(xì)胞數(shù)足夠,細(xì)胞數(shù)目 ≥ 5×105/處理)。若為懸浮細(xì)胞,直接收集。
      2.1000 g 離心 5 分鐘,棄上清,用 PBS 輕輕重懸細(xì)胞;
      3.1000 g 離心 5 分鐘,棄上清,加入 195μl Annexin V-FITC 結(jié)合液輕輕重懸細(xì)胞。
      4. 加入 5μl Annexin V-FITC,輕輕混勻。
      5. 加入 10μl 碘化丙啶染色液,輕輕混勻。
      6. 使用鋁箔進(jìn)行避光,室溫 (20-25℃) 避光孵育 10-20 分鐘,孵育過(guò)程中重懸細(xì)胞 2-3 次,隨后置于冰浴中。
      7. 立即上機(jī)檢測(cè)

      四、常見(jiàn)問(wèn)題及解答
      Q1:構(gòu)建了慢病毒轉(zhuǎn)染的穩(wěn)轉(zhuǎn)株(帶綠色熒光),檢測(cè)凋亡使用 FITC 也是綠色熒光,是否會(huì)干擾?
      A:會(huì)有干擾,可以換紅色熒光標(biāo)簽的試劑進(jìn)行檢測(cè)。

      Q2:鏡下觀(guān)察有很多漂浮細(xì)胞,可以看到凋亡,為什么染色后跑流式,凋亡比例跟 control 差不多?
      A:將漂浮的細(xì)胞收集起來(lái)再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)

      Q3:Annexin V-FITC 和 PI 在激光共聚焦顯微鏡下分別選擇的測(cè)量波長(zhǎng)是多少?
      A:綠色熒光可以使用 488nm 激發(fā),PI 是紅色熒光,使用 535nm 激發(fā)

      Q4:FITC 和 PI 孵育時(shí)間過(guò)短,對(duì)結(jié)果有什么影響?
      A:孵育時(shí)間過(guò)短,影響裝載效果,時(shí)間過(guò)長(zhǎng),也要考慮細(xì)胞本身的狀態(tài)。

      Q5:想問(wèn)一下用流氏檢測(cè)應(yīng)該怎么設(shè)門(mén)?
      A:用陰性未染色的細(xì)胞調(diào)電壓,門(mén)設(shè)置,annexin V-FITC 單染、PI 單染來(lái)調(diào)補(bǔ)償。

    色综合久久久久久久久五月| 黄色视频app下载| 欧美FREESEX黑人又粗又大 | 亚洲精品国产精品| 国产放荡对白视频在线观看| 国产人与zoxxxx另类| 中文字幕乱码人妻一区二区三区| 偷偷色噜狠狠狠狠的777米奇| 久久久久99精品国产片| 色国产色无码色欧美色在线| 无码免费一区二区三区| 亚洲熟妇无码另类久久久| 精品久久久久久久无码| 国产精品欧美一区二区三区| 免费在线黄色电影| 亚洲AV无码国产精品永久一区 | 英语老师解开裙子坐我腿中间| 人妻无码第一区二区三区| 人妻丰满熟妇岳av无码区hd| 国产精品久久久久久爽爽爽床戏| 国产精品国色综合久久| 无码熟妇人妻AV影音先锋| 国产精品毛片一区二区| 日本黄a级a片国产免费| 亚洲av无码久久| 亚洲最大的成人网站| 亚洲AV毛片一区二区三区| 国产精品18久久久久久麻辣 | 日本一区二区在线播放| 精品国产粉嫩内射白浆内射双马尾| 办公室里呻吟的丰满老师电影| 日本熟妇色XXXXX日本免费看| 少妇人妻偷人精品一区二区 | 亚洲爆乳无码精品aaa片蜜桃| 国产在视频线精品视频| 亚洲av国产精品无码市川京子| 天天摸日日添狠狠添婷婷| 亚洲精品无码专区在线| 高大丰满肥熟妇丰满大白屁股| 国产高潮流白浆啊免费a片动态| gogogo免费视频观看|